土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC）試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：甲苯1mL×1 瓶，4℃保存；（自備）
試劑二：液體7.5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入22mL 蒸餾水充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體22mL×1 瓶，4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
S-SC 能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖而被機(jī)體吸收，其酶促作用產(chǎn)物與土壤中有機(jī)質(zhì)、氮、
磷含量，微生物數(shù)量及土壤呼吸強(qiáng)度密切關(guān)，是評(píng)價(jià)土壤肥力的重要指標(biāo)。
S-SC 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在510nm 有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)510nm 光吸收增加速率與S-SC 活性成正比。
自備用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研缽、冰、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
操作步驟：
一、加樣表：
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
風(fēng)干土樣（g） | 0.03 | 0.03 |
試劑一（μL） | 5 | 5 |
振蕩混勻，使土樣全部濕潤(rùn)，37℃水浴15min | ||
試劑二（μL） | 75 | 75 |
試劑三（μL） | 220 |
|
蒸餾水（μL） |
| 220 |
充分混勻，放入37℃水浴培養(yǎng)24 小時(shí)，10000 g，4℃，離心5min，取上清液 | ||
上清液（μL） | 85 | 85 |
試劑四（μL） | 215 | 215 |
充分混勻，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，蒸餾水稀釋10倍（可以吸取100μL，加入900μL 蒸餾水稀釋；若吸光度大于4，可以加大稀釋倍數(shù)），取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中510nm 處讀吸光值A。計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
二、S-SC 活性計(jì)算：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 4.9x -0.062；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。
單位的定義：每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)S-SC 活力單位。
S-SC 活力(U /g 土樣)=(A+0.062) ÷4.9×10×V 反總÷W÷T =20.4×(A+0.062)
10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時(shí)間，1d； V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.3mL；W：樣本質(zhì)量，0.03g。
b. 用96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 2.45x -0.062；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。
單位的定義：每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)S-SC 活力單位。
S-SC 活力(U /g 土樣)=(A+0.062) ÷2.45×10×V 反總÷W÷T =40.8×(A+0.062)
10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時(shí)間，1d； V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.3mL；W：樣品質(zhì)量，0.03g。
